重组质粒测序后如何分析
重组质粒测序后如何分析 -
PCR扩增看是否有自己目的基因长度的片段被扩增，或者酶切检验，再或者融合蛋白表达看是否有相应的蛋白产生，
1.在一个平板上加入青霉素，则生长起来的是导入质粒的菌落，但这些质粒有可能是空质粒，有可能是导入目的基因的质粒。2.再拿六个平板，都加入四环素，分别在上一个平板上挑取单菌落，并分别图在六个平板上，不生长的对应菌落则是插入目的基因的质粒。大侠这之后是不是就可以断定哪个是插入目的基因的菌落了？还用进一步断是什么。
PCR扩增看是否有自己目的基因长度的片段被扩增，或者酶切检验，再或者融合蛋白表达看是否有相应的蛋白产生，
1.在一个平板上加入青霉素，则生长起来的是导入质粒的菌落，但这些质粒有可能是空质粒，有可能是导入目的基因的质粒。2.再拿六个平板，都加入四环素，分别在上一个平板上挑取单菌落，并分别图在六个平板上，不生长的对应菌落则是插入目的基因的质粒。大侠这之后是不是就可以断定哪个是插入目的基因的菌落了？还用进一步断是什么。
因为你的重组质粒不知是否构建成功，通过双酶切，PCR看是否连上去，且方向是否正确，好好把书看看吧，这样有了完善的理论，做起实验来才明白的透彻，而不是盲目的，也能自己分析！
测序： 保证浓度大于20ng/ul 15uldd水+3ul质粒DNA 如果样品过多，可以酶切鉴定后再去送测序： 酶切体系为： 10x mix：1ul Clal：0.2ul Kpn1：0.2 质粒DNA：4ul dd水：4.6ul 37度1-2h孵育 （两个内切酶就是当初设计引物时，质粒上没有，但是目的基因上有后面会介绍。
载体pet28a构建重组质粒,测序准确,转至BL21原核表达蛋白,,怎么也诱导...
1 可能是太弱你看不出来，建议用His抗体做个western 看看是不是有条带而看不出。2 是不是融解性太差，建议将你的氨基酸序列做个疏水性分析。如果确实如此的话可能要重新构载体，
在同源质粒的测序中，有些是好的，说明这段序列不存在重复序列及复杂的结构！这样的话，那些出现双峰的质粒很可能是你在挑班摇菌时挑到了临近的斑，导致抽到的质粒不纯，或者抽质粒时很多样品一起抽，不小心被同源质粒污染！你可以把那些双峰的质粒稀释后重新转化，再小心挑单菌落抽质粒测序试一下。
重组质粒后为什么还需要双酶切,PCR鉴定并测序分析 -
重组质粒是把载体质粒酶切开，连接上PCR片段，然后转化感受态细胞，培养后提质粒获得的，这一系列过程中都无法检测目的基因是否连接成功了，是否转化成功了，只有对转化后的菌再次提质粒、酶切检测或PCR检测才能确定前边的步骤是否成功。测序是更准确的方法，一般不用而已。
T载体只是为了方便克隆的一个中间步骤，所以序列没有正反之分，后面还需要进一步酶切，连接到目标载体中。测序的结果可以通过软件调整，3‘到5’，或者5‘到3’，可以通过DNAMAN或者primer等实现~
经DNA测序表明,最初获得的多个重组质粒中均未发现完全正确的基因序列...
首先构成重组质粒的过程是把质粒和目的基因（相同粘性末端）混合，加入连接酶，这就是说不仅是可能质粒+基因，还可能质粒+质粒、基因+基因。所以重组的不一定是需要的，这就是为什么要筛选。望采纳哦亲~
方法是先打开chromas，然后将测序结果中的abi后缀文件拖入，即可，一般前10-30序列和800bp以后序列均不太可信，这些位置上有套峰，也就是并非是一个碱基（一种颜色）对应一个峰。至于测序结果就用普通的txt文本文档打开即可，或者用Dnaman、Dnatool等软件均可打开，里面主要就是四种碱基的排列顺序。