反转录试剂盒说明书
谁在用Thermo 的K1622反转录试剂盒 -
Thermo 反转录试剂盒K1622使用说明RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit合成全长cDNA 1 μg小鼠心脏总RNA作为模板，用oligo(dT)18 引物进行逆转录反应。由此合成的cDNA，再作为Taq DNA Polymerase后续PCR扩增的模板。末端2024 bp片段的成功扩增，表明长度为13.8 kb的全长RN***段得到成功的逆转录。
是单链cDNA，想合成双链cDNA需要另外操作：一、cDNA第二链的合成：1. 第一链反应完成后，取2ul一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。其余的产物合并，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega):20ul 10×DNA Polymerase I buffer 6ul 10mM dNTP(自己配制)xul dd H2O 1ul RNase H(2U/u后面会介绍。
Thermo 反转录试剂盒K1622使用说明RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit合成全长cDNA 1 μg小鼠心脏总RNA作为模板，用oligo(dT)18 引物进行逆转录反应。由此合成的cDNA，再作为Taq DNA Polymerase后续PCR扩增的模板。末端2024 bp片段的成功扩增，表明长度为13.8 kb的全长RN***段得到成功的逆转录。
是单链cDNA，想合成双链cDNA需要另外操作：一、cDNA第二链的合成：1. 第一链反应完成后，取2ul一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。其余的产物合并，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega):20ul 10×DNA Polymerase I buffer 6ul 10mM dNTP(自己配制)xul dd H2O 1ul RNase H(2U/u后面会介绍。
反转录PCR ( RT-PCR )的原理反转录PCR (RT-PCR )具有较高的灵敏性、操作简单等优点，常用于基因定量分析、生物学检测等，此外常用逆转录PCR克隆目的基因。
一个可能做反转录PCR的，另一个可能做实时定量荧光PCR的。反转录PCR由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）来完成。随后，DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶H降解，留下互补还有呢？
反转录中 RNA 和 引物的量 -
takara的试剂盒里推荐的使用量是每20ul体系使用total RNA1ug，浓度为2.5uM的oligo dt 1ul。同时还可以加入随机引物或者下游特异性引物，可以提高反转录效果。
对于新手来说购买反转录试剂盒是比较理想的，买一个kit看看说明书操作就可以了。推荐两款kit TAKARA和HaiGene，这两款试剂盒都能对RNA样品中的gDNA有效去除，因此对RNA质量的要求不高。TAKARA的RR047A操作方便，反转录温度为37℃，对于大多数试验来讲是满足要求的。HaiGene的D0401操作要多一个步骤，但其后面会介绍。
反转录PCR和荧光定量PCR -
一个是RT-pcr，reverse transcription pcr的简写一个是real-time，一般不会简化为“rt-pcr”，又称实时定量pcr，Q-pcr，应该就是你说得荧光定量而你要测mRNA的量，就是先反转录成cDNA，再作定量pcr，就是前两者的合，常称为qRT-PCR 有很多real-time的试剂盒，你可以网上看下说明书到此结束了？。
一样的。反转录试剂盒中的反转录酶和反转录缓冲液等试剂成分会有所不同，但其主要作用是将RNA模板转录为cDNA，因此反转录成的cDNA序列应该是一样的，无论使用何种反转录试剂盒，不同的反转录试剂盒会有不同的反转录效率、反转录速率、特异性等特点，但最终得到的cDNA序列应该是相同的，只是其数量和好了吧！
请问做反转录有哪些注意事项吗?我做完反转录后跑PCR什么条带都没有...
RNA质量没问题，按照试剂盒说明书进行反转录操作就行了可以用actin为内参扩一下，如果扩出来了，就是你自己设计的引物问题，得重新设计引物，如果扩不出来，就是你反转录CDNA的质量问题了，用其他的反转录试剂盒试试，
主要有：1.磁珠法核酸提取试剂盒2.磁珠法提取DNA试剂盒3.DNA提取试剂盒（离心柱法）4.磁珠法RNA提取试剂盒5.RNA提取试剂盒（离心柱法）6.磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒7.反转录试剂盒8.胶回收试剂盒9.PCR纯化试剂盒10.病毒核酸提取试剂盒（磁珠法）11.土壤基因组DNA提取试剂盒12.法医样本DNA提取等会说。