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检测细胞增殖的细胞数目差异多少

2024-07-16 11:42:47 来源:网络

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MTS法测定细胞增殖的原理?该方法与MTT法有何不同? -
一、指代不同1、MTT法:利用有色物质对特定波长光的吸收特性来进行定性分析的一种方法。2、MTS法:是一种检测细胞存活和生长的方法。二、原理不同1、MTT法:为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲_(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。2、MTS法到此结束了?。
M T T 可以被线粒体内的些脱氢酶还原生结晶状的深紫色产物f o r m a Z a n。在特定溶训存在的情况下,可以被完全溶解。然后通过琚杯仪可以测定490n m波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快,则吸光度越高:细胞毒性越大,则吸光度越低使用说明:1.收集对数期细胞,调整细胞悬浮液浓度,分于9有帮助请点赞。

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什么是“四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)”? -
MTT是一种噻唑盐,化学名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)2,5-二苯基溴化四唑,水溶液为黄橙色。小鼠脾细胞受到ConA作用后发生增殖活化,其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高,MTT作为其底物参与反应,形成蓝色的甲臜(Formazan)颗粒沉积于细胞内或细胞周围,经盐酸—异丙醇溶解后为蓝色溶液,可用酶标说完了。
由Mosmann在1983年首先在鼠淋巴细胞系的研究中应用于检测I L - 2等细胞因子对细胞存活和增殖的影响。四甲基偶氮唑盐[ (3 - (4, 5 - di methylthiazol -2yl) - 2, 5 - di phenylterazolium br omide,MTT) ]为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸等会说。
IL-2活性测定问题 -
1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下,96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行MTT试验前,要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间,以保证培养终止致细胞过满。这样,才能保证MTT结晶形成到此结束了?。
一般每孔4000个细胞为宜,既细胞浓度在20000个/ml,MTT加20ul,作用四小时后洗掉上清液,注意不要将甲瓉洗掉,然后每孔加150ul DMSO,在脱色摇床上振荡10分钟,然后测吸光值。一般要低于IC50,避免非调亡性杀伤的细胞太多,造成流式细胞仪检测碎片太多。我一般用1/2-1/3的IC50,作用时间为36h。
MTT法检测体外细胞增殖及存活率的实验中为什么要设置不同的浓
设置不同的浓度来决定你接下来如何进行96孔板的排布。首先,你需要铺96孔板,每个孔的细胞浓度都必须基本一致,这样,会减少人为误差。MTT实验是检测细胞活力的实验方法,由于细胞活力与细胞数呈正相关,因此也常常用来检测细胞的增殖情况。
铺板时要保证每孔铺的细胞数目均匀一致,一般每加几孔就混匀一下。我一般是加完一排复孔就混匀一次。
mtt法测脾淋巴细胞增殖实验中的培养基需要加双抗吗 -
1)24孔板内以5~8x104cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。细胞孵育过夜;(2)准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15μg/mL,至少5个梯度);(3)细胞孵育过夜后加入筛选培养基,孵育细胞;(4)约2-3天更换新鲜的筛选培养基;(5)每日监测细胞观察存活说完了。
测一周不换液细胞还能活吗?——MTT加进去之后只要4小时孵育时间就可加DMSO,之前的时间是刺激时间,应按实验要求自己掌握换液频率。加DMSO之前的弃液:孔板离心机上先离心,然后快速扣板于滤纸上(贴壁细胞或者孔数多时)或者逐孔吸出(孔数少时)——重要的是要做对照;还有一种不用弃液的方法:将希望你能满意。