MTT浓度折算
mtt算出抑制率,怎么选择浓度 -
有人总结了一个大概的公式,根据临床用药量来推算体外浓度是不太可靠的;ml)=60×临床用药剂量(,还是要做一做MTT,再最后确定浓度,
需要样品的量为100X(10^-6) mol/L * 1X(10^-3) L * MW g/mol
有人总结了一个大概的公式,根据临床用药量来推算体外浓度是不太可靠的;ml)=60×临床用药剂量(,还是要做一做MTT,再最后确定浓度,
需要样品的量为100X(10^-6) mol/L * 1X(10^-3) L * MW g/mol
mtt和western blot加药浓度是以细胞量计算做western blot需要多少细胞并不是一个固定的值这主要取决于蛋白的表达量,没有一个绝对的量如果做细胞总蛋白的话,至少10的4次方细胞每微升蛋白裂解液。一般可以每泳道取10的5次方细胞每微升蛋白裂解液(即10微升上样)根据这个数量级,结合western blot结果后面会介绍。
做MTT时,用96-well plates的话,一般每孔分5000个或10000个细胞,加100ul培养基,培养24h后,加入不同浓度的药物,每个浓度的药物一般设3-6个平行样。给药24或者72h后,加入MTT,使其终浓度为5%(比如5mg/ml的MTT加10ul)。再培养4h.然后吸出培养基,每孔加DMSO 150ul,用酶标仪测570nm的OD值说完了。
做MTT时,96孔培养板细胞浓度该是多少? -
关键是接种于每孔的细胞数就大致处于同一水平.比如我做MTT,起初用的细胞浓度为5000/ml,每孔100ul,培养3天观察,发现细胞数太少,各孔OD值反面难于比较.后来我换用10000/ml,结果就很好.当然细胞数也不能太多,这其实取决于你细胞的生长速度,生长快的细胞,可接种浓度低点.这主要是使细胞增殖率不致受有帮助请点赞。
多设几个浓度,先把浓度范围调大点,从中选合适的浓度,再把浓度调细点。
做MTT时,96孔培养板细胞浓度该是多少 -
悬浮细胞通常是4x10 4/ml ,帖壁细胞通常是5x10 4/ml 产生差别的原因有多种。1.在加细胞时,细胞沉淀下来,导致两孔细胞数不同。我们通常用磁力转子对细胞缓慢搅拌,时刻保持细胞处于悬浮状态。2.96孔板在培养箱中,由于湿度不够,而培养箱由于具有一定的温度,使得边缘的孔水分蒸发较快,导致培养基到此结束了?。
MTT是测试细胞数量和活度的方法。我觉得你可能在控制细胞数量的时候没有做到等同,因为很多操作上的因素会影响。比如,你操作时间太长会让大量的细胞贴壁,而你还认为细胞密度是一样的,就会使后面加到的样品细胞数量减少。所以我建议你看看细胞数量上的问题。当然,也不排除染菌了。其实相当于变相增加细胞还有呢?
请问做mtt法时,怎么对药物进行梯度稀释? -
一般是两倍梯度稀释,第一孔加200ul含有药物的培养液,第二孔加100ul培养液,第三孔加100ul培养液。。。从第一孔取100ul加到第二孔混匀,从第二孔取100ul加到第三孔混匀,第三孔取100ul扔掉。。。能明白吗?如果不明白欢迎继续追问,
加完DMSO之后MTT并不会很快溶解,需要震荡加速溶解,时间不定。那你需要确定药物的浓度是否过大、药物溶解性、是否可能与MTT有反应等潜在的原因.