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MTT测量吸光度值(

2024-08-15 00:17:34 来源:网络

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mtt检测法 -
mtt检测法是一种检测细胞存活和生长的方法。mtt检测法其检测原理为,活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶,能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在后面会介绍。
MTT检测法主要用于评估细胞的相对数量和活力,而非绝对计数。在进行酶标仪检测时,为了确保实验结果的线性关系,建议MTT吸光度保持在0-0.7的范围内。MTT的使用应遵循新鲜制备原则,即现用现配,过滤后可在4℃避光条件下保存两周,或者配制成5mg/ml浓度于-20℃长期保存。为了避免反复冻融导致的分解,推有帮助请点赞。

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MTT法的注意事项 -
在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。MTT一般最好现用现配,过滤后4℃避光保存两周内有效,或配制成5mg/ml保存在-20℃长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里,用的时候说完了。
在96孔板中均匀接种细胞,培养24小时。 DAY 2: 选择生长良好的细胞,配置不同浓度的样本溶液,培养后观察。 DAY 3/4: 解冻并离心MTT试剂,配置0.5mg/mL溶液。 加入MTT溶液,4小时后去除上清,溶解甲臜,测量570nm的吸光度。 注意事项初次实验需试验接种细胞的数量和培养时间。接种说完了。
mtt侧的吸光度值在490nm 对吗 -
关键是看你选用什么溶剂了。对于DMSO,溶解后呈紫(红)色,490nm有最大吸收值;而对于SDS和酸化异丙醇,则选用570nm并且建议以655nm作为参考波长,
MTT法常用于细胞活力评估和实验研究中的细胞毒性测定。具体步骤如下:将细胞接种到96孔板,每孔100-1000个细胞,培养一定时间。 加入2毫克/毫升的MTT溶液,培养3小时后,去除上清液。 加入DMSO溶解结晶,轻轻振荡使结晶物溶解。 使用酶标仪在490nm波长处测量吸光度,记录结果。这个方法利用MTT的还还有呢?
mtt的MTT用途及原理 -
二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臢(Zā),用酶标仪在490nm波长处(英文说明书写的是570nm)测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)
1. 实验结果的统计处理需根据具体实验要求来确定。你可以选择使用吸光度(OD)值、细胞存活率或细胞抑制率等作为统计指标。2. 在查阅相关文献时,你会注意到这些指标在文献中均有应用。你可以参考这些文献来选择最适合你实验的数据表达方式。3. 绘制实验曲线并不复杂,可以使用EXCEL或SPSS等软件工具来完成好了吧!
mtt实验步骤 -
冬季温度较低时,可于37摄氏度恒温摇床内震荡10~15分钟,再上机检测。6. 酶联免疫检测仪分别于OD490nm和OD570nm处测量各孔的吸光值。7. 在一定范围内,测量的吸光度值与细胞数目呈正相关。因此,细胞存活率公式可表示为:Survival rate = (ODtreatment group/ODcontrol group) × 100%。
一般每孔4000个细胞为宜,既细胞浓度在20000个/ml,MTT加20ul,作用四小时后洗掉上清液,注意不要将甲瓉洗掉,然后每孔加150ul DMSO,在脱色摇床上振荡10分钟,然后测吸光值。一般要低于IC50,避免非调亡性杀伤的细胞太多,造成流式细胞仪检测碎片太多。我一般用1/2-1/3的IC50,作用时间为36h。