MTT比色法测细胞活力的步骤
MTT比色法测细胞活力的步骤 -
1、用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。2、离心细胞悬液，使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞，计数。3、将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml，每个微滴定板可容纳20ml细胞重悬液。4、用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液，每孔加0.5×103-10×后面会介绍。
活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。（二）试剂准备1、青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中，抽滤除菌。2、L15基础培养基：1000mlL15培养到此结束了？。
1、用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。2、离心细胞悬液，使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞，计数。3、将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml，每个微滴定板可容纳20ml细胞重悬液。4、用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液，每孔加0.5×103-10×后面会介绍。
活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。（二）试剂准备1、青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中，抽滤除菌。2、L15基础培养基：1000mlL15培养到此结束了？。
具体方法：将一定数量活细胞按照梯度稀释加入96孔板（注意设置复孔和空白孔；最好与你的实验细胞同板检测；否则重复性不好）；加入MTT作用后测各孔OD值，做曲线，拟合方程，利用该方程可计算出你的试验孔中活细胞数；接下来的就是常规了。
(6) 一般每孔4000个细胞为宜，既细胞浓度在20000个/ml，MTT加20ul，作用四小时后洗掉上清液，注意不要将甲瓉洗掉，然后每孔加150ul DMSO，在脱色摇床上振荡10分钟，然后测吸光值。
细胞活力测定常用的简便方法是 -
三、MTT法测细胞相对数和相对活力 活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生兰色结晶状甲赞颗粒积于细胞内和细胞周围。其量与细胞数呈正比，也与细胞活力呈正比。#160;1. 细胞悬液以1 000 rpm离心10分钟，弃上清液。#160;2. 沉淀加入0.5-1 ml MTT，吹打成悬液。amp;#160等会说。
用于后续步骤的处理 PC12细胞培养与接种 在37℃ CO2培养箱中，使用含血清的培养基培养PC12细胞，确保细胞稳定生长。当进行检测前，将细胞传代至96孔或6孔培养板，以便于后续的MTT和流式细胞仪实验。细胞活力与凋亡检测 MTT活力评估</: 100 μl细胞接种在96孔板中，待孵育后，通过测量吸光值等我继续说。
MTT比色法细胞活力检测实验中有哪些注意事项? -
博凌科为解答：（1）选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的内贴壁细胞长满时约有lo6个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT比色法细胞活力检测实验前，掌握每一种细胞的贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定实验中每孔的接种细胞数和培养时间，以还有呢？
一般为上板后24h），而悬浮细胞是上板同时加。但是，在操作中具体要根据实验本身要检测的指标来确定时间。如果是做有关细胞增殖的药物，加药的时机影响不大，主要是药物的作用时间起决定性因素；如果要检测的是其他一些指标（比如药物对细胞黏附功能的影响），就要在细胞贴壁以前加药了后面会介绍。
MTT比色法细胞活力检测中对照设置很重要吗? -
博凌科为解答：MTT比色法细胞活力检测中最重要的就是背景对照，就是不加细胞的对照。这包括两方面内容，一是指与实验孔相同，对照孔中也加入相同体积的培养基，各做3-4个复孔，取平均值，主要目的是为了减少培养基中含有的酚红对比色的影响；二是要在对照孔内加入与实验孔相同成分和浓度的药物（..
XTT法：用XTT代替MTT可省去溶解还原产物结晶的步骤，XTT可以被活细胞中的代谢酶还原成黄色水溶性的代谢产物（formazan）。代谢产物在OD450处有吸收峰。MTT检测法1．取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％ CO2的饱和希望你能满意。