蛋白质的定性测定方法

蛋白质的定性测定方法

western blot如何定量测定细胞中某蛋白表达量??？
1.样品制备🌛🐸_🌈☘️：使用合适的裂解缓冲液将细胞裂解🀄|🦦🦈，并使用蛋白质浓度测定方法（例如BCA或Bradford法）测定蛋白质总浓度☺️__🍁🎴。2.SDS-PAGE:根据预期的蛋白大小选择适当的凝胶🐰🎲-|🐊🍄，并加载相同量的总蛋白至各通道🪡-_🧶🐺。3.转印😡🌺-|🦏🙈：将SDS-PAGE上的蛋白转移到PVDF或nitrocellulose膜上🕊|🐈。4.封闭😚-😼🪄：使用非特异性的蛋白（如脱脂牛奶或BSA希望你能满意🐡——-🦚。
1.蛋白质纯度鉴定通常采用物理化学的方法🌻🐦__💀🏵。例如等电聚集🦠_🐯😪、聚丙烯酰胺凝胶电泳🏓🎖-*、SDS－PAGE🤢🐟-🐔、毛细管电泳以及沉降分析等😅🪀——🐊。2.如果制品是纯的🦙|——*，在这些分析的图谱上只呈现一个峰或一个条带😷_-🐋🦜。3.任何单独一种鉴定只能认为是蛋白质分子均一性的必要条件而不是充分条件*__🌜🐗。
尿液蛋白质定性的传统经典方法是?？
【答案】🌱_——👺🤥：C 尿液蛋白质定性试验🎈-🎫，加热乙酸法🐊_🦆🎍：为传统的经典方法🐡_😓，特异性强😟————😯🤧、干扰因素少🐨——_🤐，能同时检出清蛋白及球蛋白尿🎈🌨_😫🙉，但敏感度较低🏵-🍁，一般在0.15g/L左右🦟-👿🌟。本法能使含造影剂尿液变清🐾|🦀🌿，可用于鉴别试验🐼🕊--🏈🎑。
1🤫——_🐐、凯氏定氮法凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1833年建立的🖼||*🐿，现已发展为常量🦢🐜_🌛、微量🤥_🦌、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等🐭_🎱，是分析有机化合物含氮量的常用方法☄️🐿-🐇😠。凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右🧿_🦘，因此🌨-🤨，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量还有呢？
灵敏度高的检测蛋白质方法?？
操作方法🦈——_🕸🐃：在试管里加少量蛋白质溶液👺——🦃🍀，然后加几滴浓硝酸溶液🌴|_🐁🌍，微热🍃-🐉🐇，观察现象🦀🐝|——🦃🎄。实验现象☘️🙉_🦚：有黄色沉淀析出☹️🎯——🦘🐸。注意事项🐑😠-_🙉🐇：浓硝酸浓度不应低于40 😇-🐕🪰。这个方法是作为蛋白质的定性试验😵——🏐，一般不用它来测定蛋白质含量🤮|☀️🌦，原因是不知道一个蛋白质里面含有多少苯丙氨酸和酪氨酸🌹🦂-🐗，灵敏度很高🐆🐥——*🎃，但是不存在定量范围这一说😒_——😡。
尿蛋白定性为过筛性试验😸_🌪🦁，目前常用加热乙酸法🎄-😄、磺基水杨酸法和干化学试带法💀🧸|🐦*。干化学法是利用指示剂的蛋白质误差原理🐺-🥍🦢，即指示剂离子因与蛋白携带电荷相反而结合🐇🐾-——🌸，故使其所应显示的pH颜色变为较高的pH颜色变化🐫_🐼，这种pH颜色改变的幅度与清蛋白含量成正比🐘_😺。一些药物如磺胺嘧啶🌷🐳-🦁😱、奎宁引起尿液呈强碱性😟🖼_♣，可使本还有呢？
测定蛋白质含量的方法有哪些,其原理各是什么?？
Bradford法测定bai蛋白质浓度*🦚||🌚🦟：实验原理🧶🎑————🤫。双缩脲法（duBiuret法）和zhiFolin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制dao,促使科学家们去寻找更好的蛋⭐️😗——🎯。取6支试管分别标号*🤑|😖，前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液🦁——_🙁，最后一支试管加待测蛋白质溶液🎟_-😛🥀，不加标准蛋白溶液🐕|——🦕，每支试管液体总量通过加入蒸馏水有帮助请点赞🤒😫--😬。
蛋白质含量测定方法就是检测N元素的含量🐥🦍|——🦌🐭，像三聚氰胺的问题🐼🌱_🦕🤤，就是通过增加N的含量使“蛋白质”含量提高的🦟🐑_🐹🐱。国家标准检测蛋白质含量的方法叫做凯氏定氮法🍂_🎫🎋，食物中的蛋白质在催化加热条件下分解🐒——🏐🌹，导致氨和硫酸结合产生硫酸铵🪡🎏-_🌾🍄。碱蒸馏采用无硫🐒😱|🤕，硼酸吸收💐_-🎄，用硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定😲_-😑，根据酸耗计算氮含量有帮助请点赞🕸-🌖😩。

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