mtt检测细胞增殖的细胞数目差异多少

mtt检测细胞增殖的细胞数目差异多少

什么是“四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)”??？
MTT是一种噻唑盐🐬🐪--🥇🦎，化学名3-（4🐒-🎇，5-二甲基-2-噻唑）2🦌🐾——🎉，5-二苯基溴化四唑🌟|😭，水溶液为黄橙色🦡⭐️|_🐕🥎。小鼠脾细胞受到ConA作用后发生增殖活化🃏🥊__🍂，其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高🦊-👿🧧，MTT作为其底物参与反应🐤_——🐤，形成蓝色的甲臜（Formazan）颗粒沉积于细胞内或细胞周围🤑🐽_😣🦃，经盐酸—异丙醇溶解后为蓝色溶液😏😬_|🌴🐺，可用酶标等我继续说🦔——*🌜。
由Mosmann在1983年首先在鼠淋巴细胞系的研究中应用于检测I L - 2等细胞因子对细胞存活和增殖的影响🦣-_🦋。四甲基偶氮唑盐[ (3 - (4, 5 - di methylthiazol -2yl) - 2, 5 - di phenylterazolium br omide,MTT) ]为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸希望你能满意🪶_🦃。
IL-2活性测定问题?？
1.选择适当的细胞接种浓度😻-🌙。一般情况下🌳🎣————🐡，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞🧐🦠|-🦜*。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大🙊-🐽，因此🐓——🐣🐕‍🦺，在进行MTT试验前😎🦇_🌒，要进行预实验检测其贴壁率🦎|🐭🎋、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线🌘😀||🐋*，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间🌗🎴_😢🤯，以保证培养终止致细胞过满🐏*——😦。这样😶_🦉，才能保证MTT结晶形成后面会介绍🐀🕷-😹🏵。
一般每孔4000个细胞为宜🀄🌖——😼，既细胞浓度在20000个/ml🐸🐏-😗🏏，MTT加20ul🦏--🪆🐵，作用四小时后洗掉上清液🎄🦠————🍀🙂，注意不要将甲瓉洗掉🌹🐿-*🎄，然后每孔加150ul DMSO🎇_🤕🤕，在脱色摇床上振荡10分钟🐆🐗——😈，然后测吸光值🏏👺|😒。一般要低于IC50🥉-😠，避免非调亡性杀伤的细胞太多*-🌼，造成流式细胞仪检测碎片太多*🧵_|☀️。我一般用1/2-1/3的IC50🌻🤐_-🐜，作用时间为36h🐔——|😡*。
MTT法检测体外细胞增殖及存活率的实验中为什么要设置不同的浓
设置不同的浓度来决定你接下来如何进行96孔板的排布🕸-🐚🌻。首先🏈🦈——|🏅，你需要铺96孔板🦛🎁-🐟🌑，每个孔的细胞浓度都必须基本一致🐬🏵|-🌓，这样🐅-——*，会减少人为误差🌘🦂——🦂。MTT实验是检测细胞活力的实验方法🪳🦚_🙀，由于细胞活力与细胞数呈正相关🐚🌕-😐，因此也常常用来检测细胞的增殖情况🙂🐷——🐷🐹。
铺板时要保证每孔铺的细胞数目均匀一致🃏💐|🌿，一般每加几孔就混匀一下🌙🦈-_🐦⚾。我一般是加完一排复孔就混匀一次🦏-——🌵。
mtt法测脾淋巴细胞增殖实验中的培养基需要加双抗吗?？
1）24孔板内以5~8x104cells/孔的密度铺板🤕-_😂，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验🌟|🦠。细胞孵育过夜😊🌔——|🐍；（2）准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL🎱😚-🌼，至少5个梯度）🦛🐈--🐔😼；（3）细胞孵育过夜后加入筛选培养基👺|-🌹🌔，孵育细胞🧐-🦓🐗；（4）约2-3天更换新鲜的筛选培养基🌚-🌻🦟；（5）每日监测细胞观察存活是什么🦕🐽|🐭😑。
测一周不换液细胞还能活吗？——MTT加进去之后只要4小时孵育时间就可加DMSO😡——🐬😞，之前的时间是刺激时间🐄_——🪱🙂，应按实验要求自己掌握换液频率🐟😗-_🐙😇。加DMSO之前的弃液🦁🐣——_😨：孔板离心机上先离心🤯|🦒，然后快速扣板于滤纸上（贴壁细胞或者孔数多时）或者逐孔吸出（孔数少时）——重要的是要做对照🐃🦉_🐵🕷；还有一种不用弃液的方法☹️-🌙🥅：将还有呢？

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