MTT法细胞活力检测细胞活力时如何确定加药物的时间(
MTT法细胞活力检测细胞活力时,如何确定加药物的时间??？
博凌科为解答🎄————🌵：一般文献报道的方法*🦁||😷🐜，是贴壁细胞在细胞贴壁后加药物（一般为上板后24h）🌴🐲——-🎁🐱，而悬浮细胞是上板同时加😅🧐|🏈。但是🦮-🎖🤔，在操作中具体要根据实验本身要检测的指标来确定时间🐈——-🤐🐹。如果是做有关细胞增殖的药物🐓_🌼😇，加药的时机影响不大🌦🦍-🐁，主要是药物的作用时间起决定性因素🐰🌚——|🪢🌜；如果要检测的是其他一些指标（比如药物对希望你能满意🐱🦗-🦉😼。
6🎍🤡——⭐️、将培养板放回塑料盒中🐁-🐳🐼，温育至确定时间🎗_-👽🤣。三🦌🌳-——👿、生长期1🌥_-🤖、在药物作用期结束时🐖🐅|-🌘🐤，去除所有含有细胞的孔中的培养基😻--🐷，加入200μl新鲜的培养基🦡|🌜。2🦆😛————🦓、每日换液至2-3个PDTs[群体倍增时间]😃🦒-|🐙。四🌘_🕹、存活细胞数的估算1😧-🦓😈、在生长期末🦟🦙_🛷，每孔中各加入200μl新鲜的培养基😢|-🐹，在第1-11列所有孔中各加入50μl MTT希望你能满意🦓🪆_——🌻🦓。
博凌科为解答🎄————🌵：一般文献报道的方法*🦁||😷🐜，是贴壁细胞在细胞贴壁后加药物（一般为上板后24h）🌴🐲——-🎁🐱，而悬浮细胞是上板同时加😅🧐|🏈。但是🦮-🎖🤔，在操作中具体要根据实验本身要检测的指标来确定时间🐈——-🤐🐹。如果是做有关细胞增殖的药物🐓_🌼😇，加药的时机影响不大🌦🦍-🐁，主要是药物的作用时间起决定性因素🐰🌚——|🪢🌜；如果要检测的是其他一些指标（比如药物对希望你能满意🐱🦗-🦉😼。
6🎍🤡——⭐️、将培养板放回塑料盒中🐁-🐳🐼，温育至确定时间🎗_-👽🤣。三🦌🌳-——👿、生长期1🌥_-🤖、在药物作用期结束时🐖🐅|-🌘🐤，去除所有含有细胞的孔中的培养基😻--🐷，加入200μl新鲜的培养基🦡|🌜。2🦆😛————🦓、每日换液至2-3个PDTs[群体倍增时间]😃🦒-|🐙。四🌘_🕹、存活细胞数的估算1😧-🦓😈、在生长期末🦟🦙_🛷，每孔中各加入200μl新鲜的培养基😢|-🐹，在第1-11列所有孔中各加入50μl MTT希望你能满意🦓🪆_——🌻🦓。
7🦒__🌏、同时设置调零孔(培养基🪢|——🌦、MTT🤠🌦——|🤡、二甲基亚砜),对照孔(细胞😮|🐯、相同浓度的药物溶解介质🦨——-🌒😢、培养液🌾🏉————🐍、MTT🐼--☘️、二甲基亚砜)🦏-——🐹*。1🕷--🍃🎄、收集对数期细胞🤢——🐍，调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640(无血清)培养基40ul ;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培养液稀释(储存液100mg/ml,需预试寻找最佳稀释度🪱--🪢，1:10-1:20)希望你能满意🦝*__🦟☘。
博凌科为解答🐪🐥-🙉🤕：贴壁细胞一般在实验前1-2日接入96孔板*——|🥊🦉。太晚😘-_🐈，细胞在传代后有一个16小时左右的停滞期🐂😐_-🦜，此时代谢变慢🪁🖼——🦠，增殖缓慢🐁🐨|——😀，此时的MTT数值太低🦎🌝_|👿；太早🌏🌙_😊💥，实验期间🐒😫-_🏓，细胞生长过头🍀-_😬，此时有死亡和凋亡的细胞🐈⬛🐡_🎿🦟，实验时本底又过高😷__🦑，应该寻求的效果是实验时落在细胞对数早中期最好说完了🍂🌍——🌳。
MTT法测定细胞活力,在加入DMSO后可以保存一周再检测吗??？
这个不行的🐤_🌿🍀，细胞在经药物处理后🤗🐦-🐹，再加入MTT🐒|🦂🌑，就与细胞发生了反应🐑🦁-_😈，一般来说🦖🎄——_🐯，加入MTT后👺😪——_🌱，要在尽量短的时间内测定出结果才可以的🐐🐜_🧸🍁，不然结果就不准确了😺_🌺🐼，曾做过实验对比🌈-_🦗*，放置几天后再测定光吸收值🌩😬_-*🦍，与首次测定的光吸收值的数据相差很大😁-🐾🍃，已不能准确反应实验情况🧸_——🙊，建议不要等七次处理完后一起测定有帮助请点赞🐘*_🐔。
试剂与准备 首先😋-🌨♦，为实验提供基础🥇*——_🦜，我们需要以下关键试剂😱_——🦃🦙：含血清培养基🦇🦄——🐃，为细胞生长提供营养 MTT溶液（50 mg PBS溶液避光保存）🦜⚾|🤖🍂，用于细胞活力检测 0.25%胰酶🦋🐔——🎆😠，用于细胞培养处理 PBS缓冲液🐿-🐫🐼，保证实验过程的pH稳定 4%多聚甲醛🐕🌴|-🧨🐐，用于细胞固定 重铬酸钾酸洗液🌨-🏆，用于后续步骤的处理 PC到此结束了？😆🃏——_😽*。
用MTT方法细胞活力的时候,为什么加入MTT后还要继续培养一点时间?
MTT四唑蓝是一种能接受氢原子的黄色染料🐾——🦉，可作用于活细胞线粒体的呼吸链🐄——🐀🐄，被活细胞的线粒体琥珀酸脱氢酶还原为水不溶性的深紫色结晶状产物formazan🦂-🤠，MTT被活细胞吸收以及被还原为深紫色结晶物是需要一定时间的🪱|🏉🌚，所以要继续培养一段时间🎄🌩_-☹️🪳，待活细胞完全吸收MTT并充分反应后才能测定说完了😬🌾_-🦥🐝。
可以提高药物起始浓度🐕🦺——🎇🕊。做这种药物试验*😆——🍄🪄，一般都是要要做药物梯度实验的🤗||🦏🐇。如果要算抑制率🐳🦓|🐜🐑，得做空白对照组就是不加药物的细胞孔🐐|🐘🐀。用此孔OD减去实验组OD在除以空白对照OD,为了试验的准确性🌱🐈——🦚，每组药物浓度都是要做3个以上的副孔♦🐺————🌴，算平均值😕🐈_-🕹😟。
细胞水平及分子水平的生物测定是怎样的??？
一般步骤是首先培养昆虫细胞系🦨|🎫🐰，如棉铃虫细胞系🌝_|😇😨、烟草夜蛾细胞系🐉🌒|——🎀🐌，取对数生长期细胞⛳——♟🐔，置96孔微量滴定板中培养一定时间（使细胞贴壁）🌼-|🐂🍄，然后加入待测化合物🌈😪-🌟，并继续培养24h🎄|🦒，结束培养前一定时间😊🌳_🐍，向孔内加入MTT母液🐘——😭，培养结束后弃去上清液🤩🎿——🦁，再向孔内加入一定溶剂😚🎐——🦑🐕🦺，待生成物完全溶解后💫🐉|_☁️🐽，置酶联检测仪上于570还有呢？
MTT 步骤如下😻🕊——_🌺：1😐-🐿：接种细胞🎍🎳_🐕：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液🤗|-🐄，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板☺️*——*，每孔体积200ul.2:培养细胞🧸💫_-🐹：同一般培养条件🤫-🏓*，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）🕹_-🤑。3🐼——-🐲🦔：呈色🎰————🐕🐓：培养3－5天后🐪🤿|🐰，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS <ph=7.4>配)20ul.继续有帮助请点赞🕷-🌛。