MTT比色法测细胞活力的步骤
MTT比色法测细胞活力的步骤?？
1🍀_🏑、用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞🐅💮|🕸，将细胞收集到含血清的培养基中🌪🧶_🐚🦧。2🥏|——🌻、离心细胞悬液🤯|——🎄😪，使细胞沉积下来🥊☁️_-🦆。用培养基重悬细胞😘🐬——🤕🐕🦺，计数🦇-😟。3🤑_🌜、将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml🦥🎳__🐹🐹，每个微滴定板可容纳20ml细胞重悬液🌷🦕_🐑🐏。4🐾_🐩、用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液🌪🦠——-🐨，每孔加0.5×103-10×希望你能满意🎄🍄-🦛。
活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷🐏——_🪲🌻，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关🌍🐒|——🦜😪。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行🦍_——😹。（二）试剂准备1🦒|🤡😅、青链霉素溶液（100X）🤑🐵——🎲😗：青霉素100万U🦘|🐍，链霉素100万U🌺🌴-🦖，溶于100mlddH2O中🪀🐑--🎏，抽滤除菌*-_⚡️🐗。2🪳🦒__👺😋、L15基础培养基🐌🐐_😵*：1000mlL15培养有帮助请点赞🐥🦛_🐪🦖。
1🍀_🏑、用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞🐅💮|🕸，将细胞收集到含血清的培养基中🌪🧶_🐚🦧。2🥏|——🌻、离心细胞悬液🤯|——🎄😪，使细胞沉积下来🥊☁️_-🦆。用培养基重悬细胞😘🐬——🤕🐕🦺，计数🦇-😟。3🤑_🌜、将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml🦥🎳__🐹🐹，每个微滴定板可容纳20ml细胞重悬液🌷🦕_🐑🐏。4🐾_🐩、用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液🌪🦠——-🐨，每孔加0.5×103-10×希望你能满意🎄🍄-🦛。
活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷🐏——_🪲🌻，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关🌍🐒|——🦜😪。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行🦍_——😹。（二）试剂准备1🦒|🤡😅、青链霉素溶液（100X）🤑🐵——🎲😗：青霉素100万U🦘|🐍，链霉素100万U🌺🌴-🦖，溶于100mlddH2O中🪀🐑--🎏，抽滤除菌*-_⚡️🐗。2🪳🦒__👺😋、L15基础培养基🐌🐐_😵*：1000mlL15培养有帮助请点赞🐥🦛_🐪🦖。
具体方法😗😆-🌺：将一定数量活细胞按照梯度稀释加入96孔板（注意设置复孔和空白孔🌎-🧸；最好与你的实验细胞同板检测🐒|🎴；否则重复性不好）🪶🦗——|🔮🥏；加入MTT作用后测各孔OD值⭐️🏵_🏒，做曲线🏈_|🤠，拟合方程🦓🥅——_🐺🙃，利用该方程可计算出你的试验孔中活细胞数🤫🦎————🕊🦟；接下来的就是常规了🌲——_🎭。
(6) 一般每孔4000个细胞为宜🎲🌴||🐚，既细胞浓度在20000个/ml😟🐃|🤠⛸，MTT加20ul*🏒|-😑🥀，作用四小时后洗掉上清液🥇🧨-——😧，注意不要将甲瓉洗掉🐲😥_——🦉🐿，然后每孔加150ul DMSO🐪🥈————🪀☺️，在脱色摇床上振荡10分钟⛳😈_☘️🎨，然后测吸光值🪶_🥏🐙。
细胞活力测定常用的简便方法是?？
三🎖🐃_🐁🌙、MTT法测细胞相对数和相对活力 活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生兰色结晶状甲赞颗粒积于细胞内和细胞周围😍——|🌵。其量与细胞数呈正比🏸🐅——-😊☁️，也与细胞活力呈正比🏸♣————🌔💫。#160;1. 细胞悬液以1 000 rpm离心10分钟😩🌾|🌘，弃上清液🌈☁️|😧。#160;2. 沉淀加入0.5-1 ml MTT😍_——🐋🤢，吹打成悬液🌾🐘——|🎄🌼。amp;#160到此结束了？🏸🐑|😚。
用于后续步骤的处理 PC12细胞培养与接种 在37℃ CO2培养箱中😃🎐_🐳，使用含血清的培养基培养PC12细胞😎🌲_|🤖🎆，确保细胞稳定生长🦤_——😗。当进行检测前🤑🙉——🍁，将细胞传代至96孔或6孔培养板🎰——|🦉，以便于后续的MTT和流式细胞仪实验🎨——🌹。细胞活力与凋亡检测 MTT活力评估</: 100 μl细胞接种在96孔板中🎍🐚——_🦘，待孵育后☹️——-🤧🐇，通过测量吸光值等我继续说🌱-🥊☘️。
MTT比色法细胞活力检测实验中有哪些注意事项??？
博凌科为解答🌼😻-🌹：（1）选择适当的细胞接种浓度🐷🪆——🌱🕷。一般情况下🦗--🌱🐍，96孔培养板的内贴壁细胞长满时约有lo6个细胞🐩_——🌓🦊。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大🌼😏--🦌，因此🦕😖——🧐🐷，在进行MTT比色法细胞活力检测实验前🐦——🐝，掌握每一种细胞的贴壁率🌳♣——🏐🪡、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线🦜|🌞🦨，确定实验中每孔的接种细胞数和培养时间😰_|🍂😳，以希望你能满意*|🐕🪢。
一般为上板后24h）😀|_🐐😪，而悬浮细胞是上板同时加🐄-🐥🐇。但是🦊——_🎱*，在操作中具体要根据实验本身要检测的指标来确定时间🥅——_🌝🌺。如果是做有关细胞增殖的药物🎎🌖||🐣，加药的时机影响不大🐽🐫——🧸🦈，主要是药物的作用时间起决定性因素🍄🐺|🦖🎐；如果要检测的是其他一些指标（比如药物对细胞黏附功能的影响）😡————🦏🌖，就要在细胞贴壁以前加药了等我继续说😯_🐩。
MTT比色法细胞活力检测中对照设置很重要吗??？
博凌科为解答😸——🦐🎋：MTT比色法细胞活力检测中最重要的就是背景对照🪁🦗|_🌦，就是不加细胞的对照🐋_-🦋♣。这包括两方面内容🪳——🎄，一是指与实验孔相同*————😽🐐，对照孔中也加入相同体积的培养基🧩——😤，各做3-4个复孔🎎🎱-♟，取平均值😅-🦉，主要目的是为了减少培养基中含有的酚红对比色的影响🦟_😓；二是要在对照孔内加入与实验孔相同成分和浓度的药物（..
XTT法😌——😟：用XTT代替MTT可省去溶解还原产物结晶的步骤🦖🎽_😣🦍，XTT可以被活细胞中的代谢酶还原成黄色水溶性的代谢产物（formazan）☁️🦎-🧶🥈。代谢产物在OD450处有吸收峰🤭——😦🐭。MTT检测法1．取96孔细胞培养板🐾_🤤🧨，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液）🤔🐨_-🦣，在37℃ 5％ CO2的饱和有帮助请点赞🐅——|🐩。