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MTT实验最全指南实验步骤·注意事项·数据处理

2024-07-16 12:41:29 来源:网络

MTT实验最全指南实验步骤·注意事项·数据处理

MTT实验——原理、步骤、注意事项、示例图??
实验步骤DAY 1: 离心并计数处于对数期生长的细胞🍃🦤|🤩🐋。 在96孔板中均匀接种细胞🌚🦚_🏈🎯,培养24小时☘🎱__😈。 DAY 2: 选择生长良好的细胞🦌🌼_——🎨🥈,配置不同浓度的样本溶液🏆-🐃🎐,培养后观察😵|-🎑🐒。 DAY 3/4: 解冻并离心MTT试剂☘-🌍,配置0.5mg/mL溶液⭐️🤿_🦛。 加入MTT溶液😵-💐,4小时后去除上清🐘🐃——🐑,溶解甲臜🐃🎋-_🧶🐃,测量570nm的吸光度🎐🐘|_😂。
MTT法实验步骤如下😷🌔||🐕:首先🐓🎄__🙄,收集对数期细胞🔮||🤿,调整浓度至1000-10000个细胞/孔🏅🪱|🐂🦈,用100ul细胞悬液铺板于96孔平底板上🦈🐆|🦏,边缘孔用无菌PBS填充🐬*-——🐕🐞。细胞在5% CO2和37℃的环境下孵育🌻|-🐭🐌,直至形成单层细胞🧧🌿——🐞。通常在前一天下午铺板🎏🐔-🙉,次日上午加药物🦢🎃——_🌸♠,建议使用5-7个药物浓度梯度🕷-——🌾,每孔100ul🦬🌳-🛷,并设置3-5个复孔以确保结果是什么🌎|*。

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mtt实验步骤??
mtt实验步骤🍃🪆-🥌:1. 胰酶消化对数期细胞🦄🕸——_🐆,血清中止消化🥊😾|——🐱,移液枪吹打至细胞悬浮🌘😝-|🤭,细胞悬液1000rpm离心5分钟😗🎀_😨,弃上清🏓🎉__🐰🦒,重悬沉淀制成细胞悬液🎽_🀄🎋。细胞计数调整其浓度至5×104/ml(具体细胞密度根据需求适当调整)😾|——🐀。2. 将细胞悬液制备好后☁️_——🌪🐳,轻轻混匀🐼🐣_🥀,植入96孔板🤣🦂||😑🐰。推荐每个实验分组设一列(6个复孔)🎣🕹-👹🥎,每孔加入希望你能满意🤒😙————🌲。
细胞接种步骤贴壁细胞🌘-|🦚:调整细胞密度🐄🐺_|🪱,铺板后加入药物🐲😐__🦜,孵育观察🐌😋——_🐓,加入MTT和二甲基亚砜进行测量🌵_🔮✨。悬浮细胞🦧|🦒:调整细胞悬液浓度😇——😢,加入药物和MTT后直接测量☹️|🐉,离心后溶解结晶物并测量吸光值🕷|-🦡🎾。细胞接种密度🦩——-🐃🏐:根据细胞特性选择合适的密度🐁——_🐚*,不宜过高或过低🎲🌵——🎿🥇,一般推荐10000/ml🎭☀️__🛷🐍,每孔100ul🕷🌈——🦆。最后🐁-🥍,一些实验技巧和建议😹🐭|🦕💀:..
MTT比色法细胞活力检测实验中有哪些注意事项???
博凌科为解答🧧-😗:(1)选择适当的细胞接种浓度🐝——_🎲🐖。一般情况下🐑🦧-_🐂,96孔培养板的内贴壁细胞长满时约有lo6个细胞😘🐣——-♠🐚。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大🦓——_🐝,因此🐼||😊💫,在进行MTT比色法细胞活力检测实验前🦕🤗|🎣,掌握每一种细胞的贴壁率🦙-_🎋🐰、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线🦕-🤫,确定实验中每孔的接种细胞数和培养时间🎰🦘——-🦠🐓,以有帮助请点赞😒_🥎。
普通MTT法实验步骤🌪🤡_|🌵🦔:1🌿🤮_——🌹🌈:接种细胞🖼🎃——🐞🌺:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液🐺|-*,以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板😿🪰——|😑,每孔体积200ul.2: 培养细胞🕷🦅-——🌷🕹:同一般培养条件*-_😺🌑,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)🎃☹️|🐈😲。3😀-|🤡:呈色🐽🌩-🤣🦍:培养3-5天后🌷🌼——🐽,每孔加MTT(噻唑蓝)溶液(5mg/ml用PBS配制😅-🌱*,pH=7说完了🎃🤧——*🐺。.
mtt实验原理??
药物MTT法实验步骤🌺-|🐏:贴壁细胞🍁😏--*:1. 收集对数期细胞🧩_-😮🎃,调整细胞悬液浓度🪲|_🎭🥇,每孔加入100ul🦅|🐊,铺板使待测细胞调密度1000- 10000 /孔🐈——_🦗,每次加入细胞的枪头贴着96孔的四周🦔🐥——🪱,旋转缓慢加入🪁🤩__🐡🤩,加入细胞后可前后左右水平摇晃几下🐙|——🦓🐒,以让细胞铺板更佳😮|_🐔🐁。2. 5%CO2🐏||🤖*,37℃孵育🦚-😻,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板)💫||🌴,加入等会说🐾_🦜🎿。
(悬浮细胞推荐使用WST-1,培养4 h后可跳过步骤4),直接酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值)4)离心(1000转x10min),小心吸掉上清*——*🤕,每孔加入100 ul二甲基亚砜😷😺|——🦕🐸,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解🐓——🎗。在酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值🐆🏆-|🦘🌞。5)同时设置调零孔(培养基🐯*——*🐊、MTT后面会介绍🪳🐸-_😇🧶。
细胞活力测定常用的简便方法是??
实验步骤一🌴——🐰、细胞计数 1.  将血球计数板及盖片用擦试干净🦡|🐃🥇,并将盖片盖在计数板上🏑|😐🐪。#160;2.  将细胞悬液吸出少许🦇🦖|🥉,滴加在盖片边缘🐌🦏——👽,使悬液充满盖片和计数板之间🐨🪆_-😩🐐。#160;3.  静置3分钟🐜🏅--🦛。#160;4.  镜下观察🐖🦑|——🎉,计算计数板四大格细胞总数🐚🐨_🦔🐨,压线细胞只计希望你能满意🌑——|💥🙁。
②设计实验🎐-🎲,实验步骤可参看人教版选修三第34🌥__🐰、35叶③学生动手操作🦆😫_🤨🐵,操作过程中🐽|😊🐾,老师强调注意事项🧸|🦕🤿:植物组织培养的成败🌵🎗|_🎽,关键是严格的无菌操作♣——🎖🐐,如手的消毒🐫-——🐑、外植体的消毒🐌🦂_-👿、操作器具及培养基的消毒🦃😣_🎨🌿,并让学生思考为什么要控制严格的无菌条件?再让学生分析两种培养基的区别及培养条件的控制---脱分化的条件是🏒🙈__🎃⛅️,23—26度恒温到此结束了?🎰--🪄。