当前位置 > 荧光定量pcr荧光定量pcr原理及步骤

• 

  技术分享|一文弄清荧光实时定量PCR

  实时荧光定量PCR技术(Real-time Quantitative PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最终通过相对定量或绝对定量的方法确定各个样本的本底表达量。qPCR所使用的荧光化学试剂可分为两种:荧光染料和荧光探针。

  2024-08-15 网络 更多内容 850 ℃ 429
• 

  荧光定量PCR技术

  荧光定量PCR技术，最常用的方法是DNA结合染料SYBR GreenⅠ的非特异性方法和Taqman水解探针的特异性方法。主要区别 理论上PCR是一个指数增长的过程，但是实际的PCR扩增曲线并不是标准的指数曲线，而是S形曲线。这是因为随着PCR循环的增多，扩增规模迅速增大，Taq酶、dNTP、引物，甚至DNA模板等各种PCR要素逐渐不敷需求，...

  2024-08-15 网络 更多内容 237 ℃ 79
• 

  荧光定量PCR是干什么用的

  一般情况下,如果患者接触了病毒感染者、不干净的水源或者存在高危性行为,为了尽早明确患者是否发生感染,可以考虑进行荧光定量PCR,明确患者的感染情况,从而进行针对性处理,避免耽误病情。 荧光定量PCR不具有辐射,一般不会对患者产生不良影响,所以多数人群均可以做该项检查,并且进食不会对检查结果产生影响,检查前不需要保持...

  2024-08-15 网络 更多内容 203 ℃ 318
• 

  荧光定量PCR(qPCR)——引物设计篇

  上下游引物之间也不能存在互补序列，引物之间互补会产生引物二聚体而降低PCR效率甚至影响定量准确性。如果引物二聚体及发夹结构不可避免，应尽量使其△G值不要过高（应小于4.5kcal/mol）。8. 引物扩增的是目标特异产物。qPCR检测最终目的是了解目的基因的丰度，如果出现非特异扩增，定量会不准确。所以设计好引物后，...

  2024-08-15 网络 更多内容 749 ℃ 149
• 

  超全教程|实时荧光定量PCR实验数据分析

  实时定量PCR也被称为实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)，是一种在DNA扩增反应中加入荧光基团，以荧光信号积累实时监测每次PCR循环后产物总量，进而对待测样品中的目的序列进行定量分析的方法。基本原理 在学习实时定量PCR数据处理之前，我们首先需要了解一下它的数学原理，Ct值为什么是我们数据处理过程中...

  2024-08-15 网络 更多内容 136 ℃ 377
• 

  荧光定量PCR实验方法和应用介绍

  实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 在常做的QPCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中...

  2024-08-15 网络 更多内容 299 ℃ 667
• 

  涨知识|qPCR专场五:如何分析荧光定量数据

  荧光定量PCR是实验室中出镜率非常高的一种检测方法。该方法通过在PCR体系中添加荧光基团来记录DNA产物的累积情况，从而达到对PCR过程进行实时监控的目的，并且可以通过数据分析计算出起始模板量，这就是“荧光定量”中“定量”一词的来源。荧光定量PCR实验因为灵敏度高所以经常是差之毫厘谬以千里，所以在实验过程中，...

  2024-08-15 网络 更多内容 1000 ℃ 567
• 

  小知识 | 荧光定量PCR专场(三)

  荧光定量PCR往期内容请点击:小知识|荧光定量PCR(一) 小知识|荧光定量PCR(二) (二)荧光定量PCR的实验流程(主要讲述染料法qPCR) 02 模板获取 荧光定量PCR的模板通常是cDNA,少部分是DNA。在此主要讲述cDNA作为qPCR的模板获取,cDNA模板的质量与荧光定量PCR的实验结果密切相关。但逆转录得到cDNA是混合物,除cDNA外,还有...

  2024-08-15 网络 更多内容 403 ℃ 550
• 

  PCR 实战宝典 No.5:实时荧光PCR

  实时荧光 PCR(real-time PCR)是在 PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实现实时监测 整个 PCR 反应进程,对起始模板进行定量分析的方法。1995 年第一台实时荧光定量 PCR 仪由美国 Applied Biosystem 公司推出,实现了 PCR 检测由定性到定量的飞跃。与常规 PCR 相比,实时荧光定量 PCR 在反 应体系中加入荧光...

  2024-08-15 网络 更多内容 503 ℃ 421
• 

  荧光定量PCR的那些曲线,你真的看懂了吗

  荧光定量PCR是通过检测并记录反应体系中荧光信号的变化来实时监测整个PCR进程,这就不得不来说一说荧光定量PCR中的三大曲线:扩增曲线、熔解曲线、标准曲线。 首先简单了解一下荧光定量PCR的扩增程序,以荧光染料法为例,扩增程序可分为扩增反应阶段和熔解反应阶段。

  2024-08-15 网络 更多内容 550 ℃ 198