当前位置 > wb定量分析磷酸化蛋白wb定量分析磷酸化蛋白的作用

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  wb磷酸化和非磷酸化怎么定量

  1、样本是否表达: 查阅资料或通过预实验确定。 2、对照设置: 阳性和阴性对照。 总蛋白抗体对照,对于特定时间的特定样品,磷酸化和非磷酸化蛋白质的总和代表该特定蛋白质的总量。在相同的 WB 检测中, 磷酸化蛋白质的量增加通常伴随着非磷酸化蛋白质的降低。 3、内参设置: 根...

  2024-08-17 网络 更多内容 565 ℃ 619
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  磷酸化蛋白WB究竟注意哪些条件

  嗯,磷酸化蛋白的抗体一定要选好,最好不要买santa的,可以买upstate的,就是millipore的,或者abcam的。 第一,血清成分复杂,最好用密理博的montage albumin deplete kit去除血清里50%的白蛋白 第二,磷酸化蛋白提取蛋白的时候,最好加入原钒酸钠,和磷酸酶抑制剂,防止蛋白脱磷酸化。 第三...

  2024-08-17 网络 更多内容 896 ℃ 148
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  血清中磷酸化蛋白如何做WB

  嗯,磷酸化蛋白的抗体一定要选好,最好不要买santa的,可以买upstate的,就是millipore的,或者abcam的。 第一,血清成分复杂,最好用密理博的Montage Albumin Deplete Kit去除血清里50%的白蛋白 第二,磷酸化蛋白提取蛋白的时候,最好加入原钒酸钠,和磷酸酶抑制剂,防止蛋白脱磷酸化。 第...

  2024-08-17 网络 更多内容 836 ℃ 736
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  磷酸化蛋白WB究竟注意哪些条件

  磷酸化蛋白WB有很多注意条件 比如: 一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂,还要加入一定量的磷酸酶抑制剂,否则即使条带压出来也会很浅,结果也不可信。 加一抗后最好4度过夜,保证抗体有充分的结合时间。因为磷酸化的蛋白只占总的蛋白量的极少部分。4 度也可使一抗重复使用多...

  2024-08-17 网络 更多内容 870 ℃ 225
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  蛋白定量分析

  反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比,测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。Lorry法。蛋白质与碱性铜溶液中的Cu2+络和使得肽键伸展,从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应,产生蓝色,在一定浓度范围内,其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨...

  2024-08-17 网络 更多内容 132 ℃ 822
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  蛋白定量分析

  反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比,测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。Lorry法。蛋白质与碱性铜溶液中的Cu2+络和使得肽键伸展,从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应,产生蓝色,在一定浓度范围内,其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨...

  2024-08-17 网络 更多内容 397 ℃ 611
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  做磷酸化蛋白WB,提取蛋白时不加磷酸酶抑制剂影响大么?

  做磷酸化蛋白WB,提取蛋白时不加磷酸酶抑制剂会有影响,大不大要看具体的实验结果 不加磷酸化抑制剂也可以做磷酸化蛋白WB,但是有可能会影响具体的实验结果,大部分时候不加磷酸化抑制剂也能得到结果的。 需要注意蛋白的磷酸化是一个非常迅速的反应,所以取样品的过程要迅速...

  2024-08-17 网络 更多内容 477 ℃ 39
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  蛋白质磷酸化的蛋白磷酸激酶的纯化与活性分析

  酶的纯度可用SDSPAGE检测并定量测定其比活性。 (二)蛋白磷酸激酶的活性分析 蛋白激酶活性分析分为两步: ①末端标记的三磷酸核苷核供体(通常是ATP,有时用GTP)中的磷酸基团转移到蛋白质或肽底物上; ②将磷酸化的底物分离出并进行定量分析。 前者通常在溶液中进行,酶和底物...

  2024-08-17 网络 更多内容 973 ℃ 445
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  如何检测蛋白是否发生磷酸化

  有磷酸化的抗体, 磷酸化抗体可以识别蛋白质的磷酸化或者非磷酸化形式,而且可以在避免放射污染的情况下,对磷酸化蛋白进行定性和定量分析,因此特异性磷酸化抗体是研究蛋白质磷酸化的重要工具。

  2024-08-17 网络 更多内容 636 ℃ 951
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  如何检测蛋白是否发生磷酸化

  有检测磷酸化的特异性抗体,还有就是磷酸化后,WB条带会有延迟现象

  2024-08-17 网络 更多内容 206 ℃ 768